MIXL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405367-ACT

MIXL1 (mix paired-like homeobox) codifica un fattore di trascrizione homeobox che agisce come regolatore chiave della specificazione del mesendoderma e dei programmi precoci della stria primitiva durante lo sviluppo umano. Integra segnali provenienti da vie di sviluppo quali TGF-β/Activina/NODAL, WNT e BMP per coordinare l’impegno di linea e le reti trascrizionali a valle che governano le decisioni sul destino cellulare. Un’espressione aberrante di MIXL1 è stata riportata in neoplasie ematologiche, incluse alcune sottopopolazioni di leucemia mieloide acuta, in cui può indicare stati di differenziamento alterati e deregolazione trascrizionale. In quanto regolatore dello sviluppo la cui espressione è alterata in patologie, MIXL1 è ampiamente utilizzato come readout e come bersaglio di perturbazione negli studi di differenziamento delle cellule staminali, nei modelli ematopoietici e nelle analisi delle reti trascrizionali.

MIXL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MIXL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MIXL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MIXL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MIXL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MIXL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MIXL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MIXL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MIXL1 nelle cellule tumorali con espressione di MIXL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.