Mitoferrin Plasmide Double Nickase (h): sc-412181-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mitoferrin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Mitoferrin Double Nickase Plasmid (h) e il Mitoferrin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC25A37. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mitoferrin Plasmide Double Nickase (h) | sc-412181-NIC | 20 µg | $410.00 |
SLC25A37 codifica la mitoferrina umana, un trasportatore della membrana mitocondriale interna che importa ferro ferroso nella matrice mitocondriale per sostenere la biosintesi dell’eme e l’assemblaggio dei cluster ferro–zolfo (Fe–S). Regolando la disponibilità di ferro nei mitocondri, la mitoferrina influenza la capacità di fosforilazione ossidativa, l’omeostasi redox e i programmi di differenziamento eritroide che richiedono un’elevata produzione di eme. Un’alterazione del traffico del ferro mitocondriale e, a valle, della biogenesi di eme/Fe–S è stata associata a difetti dell’eritropoiesi e a fenotipi di disfunzione mitocondriale, rendendo SLC25A37 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici del metabolismo del ferro. La perturbazione di questa via può inoltre modificare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e la funzione di enzimi metabolici che dipendono da cofattori Fe–S.
Mitoferrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC25A37 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC25A37. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC25A37. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC25A37 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.