MICA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418864-ACT

MICA (MHC-Klasse-I-Polypeptid-verwandte Sequenz A) kodiert ein stressinduzierbares Zelloberflächen-Glykoprotein, das als Ligand für den aktivierenden Rezeptor NKG2D auf NK-Zellen und Subpopulationen von CD8+-T-Zellen fungiert. Durch die Bindung an NKG2D trägt MICA zu Mechanismen der Immunüberwachung bei, die zellulären Stress, Infektionen und Transformation erkennen, und beeinflusst dadurch die zytotoxische Aktivierung sowie die Zytokinsignalgebung an der immunologischen Synapse. Die MICA-Expression wird durch DNA-Schadensantworten, Hitzeschock-Signalwege und inflammatorische Signalgebung geprägt, und ihr Shedding bzw. eine veränderte Präsentation auf der Zelloberfläche kann die Rezeptorbindung modulieren. Eine dysregulierte MICA–NKG2D-Signalgebung wird mit Tumor-Immunescape, chronisch entzündlichen Zuständen und einer mit Autoimmunerkrankungen assoziierten Immunaktivierung in Verbindung gebracht.

MICA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MICA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MICA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MICA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MICA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MICA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MICA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MICA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MICA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MICA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.