Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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mHMGCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403941
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mHMGCS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico mHMGCS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mHMGCS Antibody (B-8): sc-393256
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mHMGCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403941 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
HMGCS2 codifica la 3-idrossi-3-metilglutaril-CoA sintasi mitocondriale (mHMGCS), l’enzima limitante della chetogenesi che catalizza la formazione di HMG-CoA a partire da acetoacetil-CoA e acetil-CoA. Collega la β-ossidazione epatica degli acidi grassi alla produzione di corpi chetonici durante il digiuno e lo stress metabolico, influenzando l’omeostasi energetica mitocondriale e l’equilibrio redox. L’attività di HMGCS2 è integrata con programmi trascrizionali guidati da PPARα e con vie di sensing dei nutrienti che coordinano l’utilizzo dei lipidi, il flusso gluconeogenico e il metabolismo ossidativo. La deregolazione di HMGCS2 è stata associata a errori congeniti della sintesi dei corpi chetonici e a fenotipi metabolici alterati osservati in studi sulle patologie epatiche e sul metabolismo tumorale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mHMGCS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HMGCS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HMGCS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HMGCS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mHMGCS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HMGCS2 per lo studio della segnalazione di mHMGCS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni HMGCS2 critici per la funzione di mHMGCS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HMGCS2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal mHMGCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal mHMGCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HMGCS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal mHMGCS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR mHMGCS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HMGCS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HMGCS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.