MGAT3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415617-ACT

Il gene umano MOGAT3 (detto anche MGAT3) codifica una monoacilglicerolo aciltransferasi che catalizza l’acilazione del monoacilglicerolo per formare diacilglicerolo, un intermedio chiave nella biosintesi dei trigliceridi. Questa attività enzimatica collega il rimodellamento dei glicerolipidi a reti metaboliche lipidiche più ampie che influenzano la composizione delle membrane, la formazione delle gocce lipidiche e l’immagazzinamento energetico cellulare. Modulando il diacilglicerolo e i pool lipidici a valle, MGAT3 può intersecarsi con processi di segnalazione sensibili ai secondi messaggeri lipidici e con risposte allo stress metabolico. Un’alterata regolazione del metabolismo dei glicerolipidi è associata a fenotipi di malattia metabolica e a vie rilevanti per la dislipidemia, rendendo MGAT3 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla gestione dei lipidi nelle cellule umane.

MGAT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MOGAT3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MGAT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MOGAT3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MOGAT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MGAT3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MOGAT3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MGAT3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MGAT3 nelle cellule tumorali con espressione di MOGAT3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.