MFSD2 Plasmide Double Nickase (m): sc-429366-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MFSD2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MFSD2 Double Nickase Plasmid (m) e il MFSD2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mfsd2a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MFSD2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429366-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mfsd2a codifica MFSD2A, un trasportatore di membrana multipasso appartenente alla superfamily dei “major facilitator”, fortemente arricchito nelle barriere endoteliali e coinvolto nel trasporto di lipidi e nutrienti attraverso interfacce vascolari specializzate. Nel topo, MFSD2A è noto soprattutto per la regolazione della transcitosi nell’endotelio microvascolare cerebrale, sostenendo l’integrità della barriera emato-encefalica e influenzando l’omeostasi del SNC. Grazie al suo ruolo nel trasporto di membrana e nel controllo del traffico vescicolare, MFSD2A incide su vie del metabolismo lipidico e su funzioni di barriera cellulare rilevanti per modelli di neurosviluppo e neuroinfiammazione. Alterazioni dell’attività di MFSD2A sono state associate a fenotipi di disfunzione di barriera e a meccanismi di malattie neurologiche, rendendolo un bersaglio utile per studiare la biologia del trasporto endoteliale e la regolazione metabolica rilevante per il SNC.
MFSD2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mfsd2a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mfsd2a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mfsd2a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mfsd2a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.