Met Plasmide Double Nickase (h): sc-400101-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Met Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Met Double Nickase Plasmid (h) e il Met Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MET. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Met Antibody (D-4): sc-514148
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Met Plasmide Double Nickase (h) | sc-400101-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Met Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400101-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MET codifica il recettore del fattore di crescita degli epatociti (Met), una tirosin-chinasi recettoriale che avvia programmi di segnalazione che controllano proliferazione, sopravvivenza, motilità e morfogenesi cellulare. In seguito al legame con HGF e all’autofosforilazione del recettore, Met attiva vie che includono PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK, STAT e la segnalazione della famiglia SRC, coordinando le dinamiche epitelio–mesenchimali e il rimodellamento tissutale. La deregolazione della segnalazione di MET è implicata in processi oncogenici quali la crescita invasiva, fenotipi associati alla metastasi e la resistenza a perturbazioni mirate delle vie di segnalazione, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici. MET è rilevante anche nella biologia dello sviluppo e rigenerativa, dove la segnalazione HGF–MET guida l’organogenesi e le risposte di riparazione delle ferite.
Met Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MET nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MET. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MET. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MET interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.