MerTK Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421631-ACT

Il gene murino **Mertk** codifica **MerTK**, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia **TAM** che riconosce la fosfatidilserina sulle cellule apoptotiche tramite ligandi quali **GAS6** e **PROS1**, promuovendo l’efferocitosi e la risoluzione immunitaria anti-infiammatoria. La segnalazione di MerTK attiva programmi dipendenti da **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e **STAT**, coordinando la sopravvivenza di macrofagi e microglia, la modulazione delle citochine e l’omeostasi tissutale. Nella retina e nel sistema nervoso centrale, MerTK sostiene la rimozione dei detriti cellulari e il mantenimento di stati immunitari adiacenti alle barriere, collegando la sua disregolazione a una fagocitosi difettosa, a infiammazione cronica e a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione. Un’attività aberrante della via di MerTK è studiata anche nei macrofagi associati al tumore e nell’immunosoppressione all’interno del microambiente tumorale, rendendo **Mertk** un nodo utile per analizzare la segnalazione immunitaria innata e la biologia dei fagociti in modelli murini.

MerTK Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mertk senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MerTK Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mertk nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mertk, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MerTK. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mertk nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MerTK nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MerTK nelle cellule tumorali con espressione di Mertk silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.