MerTK CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401629-ACT

Humanes MERTK kodiert die Rezeptortyrosinkinase MerTK, ein Mitglied der TAM-Familie, die über Liganden wie GAS6 und PROS1 Phosphatidylserin auf apoptotischen Zellen erkennt, um die Efferzytose und die Auflösung von Entzündungen zu fördern. Die MerTK-Signalübertragung aktiviert PI3K–AKT-, MAPK/ERK- und STAT-Signalwege, um homöostatische Programme in Makrophagen und Mikroglia zu koordinieren, die angeborene Immunaktivierung zu dämpfen und Zellüberleben sowie Migration zu beeinflussen. Im Tumormikromilieu können MerTK-abhängige Clearance- und immunregulatorische Signale die Zytokinprofile und die Funktion antigenpräsentierender Zellen prägen, während MerTK im Nervensystem zur phagozytischen Aktivität der Mikroglia und zum Gewebeumbau beiträgt. Eine dysregulierte MERTK-Expression oder -Signalgebung wurde in der Krebsbiologie und in der neuroinflammationsbezogenen Forschung mit einem veränderten Entzündungsniveau und aberranter Phagozytose in Verbindung gebracht.

MerTK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MERTK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MerTK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MERTK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MERTK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MerTK-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MERTK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MerTK-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MerTK-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MERTK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.