MerTK Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401629-ACT

Il gene umano **MERTK** codifica la tirosin-chinasi recettoriale **MerTK**, un membro della famiglia TAM che riconosce la fosfatidilserina sulle cellule apoptotiche tramite ligandi come **GAS6** e **PROS1**, promuovendo l’efferocitosi e la risoluzione dell’infiammazione. La segnalazione di MerTK coinvolge le vie **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e **STAT** per coordinare programmi omeostatici di macrofagi e microglia, attenuare l’attivazione dell’immunità innata e influenzare sopravvivenza e migrazione cellulare. Nel microambiente tumorale, la clearance dipendente da MerTK e la segnalazione immunoregolatoria possono modulare la produzione di citochine e la funzione delle cellule presentanti l’antigene, mentre nel sistema nervoso contribuisce all’attività fagocitica della microglia e al rimodellamento dei tessuti. Un’espressione o una segnalazione di MERTK disregolata è stata collegata ad alterazioni del tono infiammatorio e a fagocitosi aberrante in diversi contesti di ricerca, dalla biologia del cancro alla neuroinfiammazione.

MerTK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MERTK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MerTK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MERTK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MERTK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MerTK. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MERTK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MerTK nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MerTK nelle cellule tumorali con espressione di MERTK silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.