Partículas Lentivirales de Activación (h) megalin/LRP2: sc-401094-LAC

LRP2 codifica megalina, un gran miembro endocítico de la familia de receptores de LDL que actúa como depurador de múltiples ligandos y transportador en la membrana plasmática. La megalina media la internalización y el tráfico dependientes de clatrina de diversas cargas, incluidas proteínas fijadoras de vitaminas, lipoproteínas y morfógenos, configurando así la reabsorción epitelial y la homeostasis de nutrientes. Mediante interacciones con proteínas adaptadoras y correceptores, LRP2 influye en la clasificación endosomal, el reciclaje del receptor y nodos de señalización posteriores como Sonic hedgehog y vías relacionadas con TGF-β. Las alteraciones en la expresión o la función de LRP2 se han vinculado a fenotipos del desarrollo y a disfunción específica de tejidos, lo que respalda su uso como diana mecanística en estudios de biología epitelial y transporte mediado por receptores.

Las partículas de activación lentiviral megalin/LRP2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de LRP2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral megalin/LRP2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción LRP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de megalin/LRP2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo LRP2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.