MeCP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401228-LAC

MECP2 codifica la proteina legante il metil-CpG 2 (MeCP2), un regolatore associato alla cromatina che si lega al DNA metilato e modella i programmi trascrizionali coordinando la repressione e l’attivazione epigenetiche. MeCP2 influenza la differenziazione neuronale, la maturazione sinaptica e l’espressione genica dipendente dall’attività attraverso interazioni con complessi corepressori e vie di rimodellamento della cromatina. L’alterazione del dosaggio di MECP2 è strettamente collegata a fenotipi neuroevolutivi e cognitivi, rendendolo un nodo chiave per lo studio della regolazione dipendente dalla metilazione del DNA e dell’omeostasi neuronale. Nei modelli cellulari umani, MECP2 rappresenta un punto di accesso gestibile per analizzare il controllo trascrizionale, la dinamica degli stati della cromatina e le risposte delle vie a valle nel sistema nervoso.

Le particelle di attivazione lentivirale MeCP2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MECP2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MeCP2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MECP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MeCP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MECP2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.