Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCM3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402076-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCM3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCM3 Double Nickase Plasmid (h) e il MCM3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MCM3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCM3 Antibody (E-8): sc-390480
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCM3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCM3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCM3 codifica per la proteina “minichromosome maintenance complex component 3”, una subunità centrale dell’elicasi MCM2–7, necessaria per il licensing delle origini e per la progressione della forcella di replicazione del DNA durante la fase S. Come parte del complesso di pre-replicazione, MCM3 coordina la sua attività con CDC45 e GINS per guidare l’assemblaggio del replisoma, sostenendo la stabilità del genoma e la duplicazione fedele dei cromosomi. Alterazioni delle dinamiche di replicazione dipendenti da MCM3 possono favorire stress replicativo, modifiche dei checkpoint del ciclo cellulare e accumulo di danni al DNA, processi spesso studiati nel contesto della biologia del cancro e dei disturbi proliferativi. MCM3 è quindi ampiamente utilizzato come punto di ingresso meccanicistico per studiare il controllo della replicazione del DNA, le risposte allo stress replicativo e la regolazione del ciclo cellulare.
MCM3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCM3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCM3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCM3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCM3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.