MCH-1R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402512

Übersicht

MCHR1 kodiert den Melanin-konzentrierenden Hormonrezeptor 1 (MCH-1R), einen GPCR der Klasse A, der das MCH-Neuropeptid bindet und neuronale Signalprozesse reguliert, die an der Energiehomöostase, dem Fressverhalten, Wachheit und stimmungsbezogenen Prozessen beteiligt sind. Nach Aktivierung koppelt MCH-1R hauptsächlich an Gi/o- und Gq-Signalwege, um intrazelluläres cAMP, die Phospholipase-C-Signalübertragung, den Calciumfluss sowie nachgeschaltete Kinasekaskaden wie ERK/MAPK zu modulieren. Die Rezeptoraktivität beeinflusst die synaptische Transmission und neuroendokrine Outputs in hypothalamischen und limbischen Schaltkreisen. Eine Fehlregulation der MCHR1-Signalgebung wurde mit metabolischen Phänotypen wie Adipositas und Insulinresistenz in Verbindung gebracht, ebenso wie mit neuropsychiatrischen Merkmalen, die für die Angst- und Depressionsforschung relevant sind.

Das MCH-1R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MCHR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MCHR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MCHR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MCH-1R-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MCHR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MCH-1R-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MCHR1-Exone abzielen, die für die MCH-1R-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MCHR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MCH-1R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MCH-1R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MCHR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MCH-1R HDR-Plasmid (h) und MCH-1R HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MCHR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MCHR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.