MCC Plasmide Double Nickase (h): sc-404248-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCC Double Nickase Plasmid (h) e il MCC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MCC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCC Antibody (A-9): sc-398216
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCC Plasmide Double Nickase (h) | sc-404248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **MCC** codifica la proteina *Mutated in Colorectal Cancers*, un fattore citoplasmatico e nucleare coinvolto nella regolazione della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e dell’omeostasi dei tessuti epiteliali. MCC è stato collegato a processi associati a Wnt/β-catenina e al controllo trascrizionale, con ruoli riportati nel limitare la segnalazione proliferativa e nel coordinare risposte legate ai checkpoint. Un’espressione alterata o mutazioni di MCC sono osservate in molteplici tipi di tumore, incluso il carcinoma colorettale, e sono state associate a cambiamenti nei fenotipi di migrazione, polarità e stabilità genomica rilevanti per la trasformazione oncogena. Come bersaglio di ricerca, MCC consente l’analisi meccanicistica delle reti di segnalazione che collegano programmi trascrizionali a proliferazione e architettura tissutale.
MCC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.