Plasmide CRISPR d'Activation (h) MBD2: sc-401561-ACT

La MBD2 humaine (methyl-CpG binding domain protein 2) est un lecteur de la méthylation de l’ADN qui se lie aux dinucléotides CpG méthylés et contribue à traduire les marques épigénétiques en effets transcriptionnels. Par ses interactions avec des complexes de remodelage de la chromatine et de désacétylases d’histones tels que NuRD, MBD2 participe au silençage génique, à la compaction de la chromatine et à la régulation de programmes spécifiques de lignée cellulaire. Elle influence des processus tels que la différenciation cellulaire, la signalisation immunitaire et le maintien de la stabilité épigénétique à l’échelle du génome. Une activité de MBD2 dérégulée et une répression dépendante de la méthylation altérée ont été associées à des réseaux transcriptionnels aberrants observés dans le cancer et d’autres troubles impliquant un déséquilibre épigénétique.

MBD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MBD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MBD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MBD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MBD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MBD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MBD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MBD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MBD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MBD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.