MBD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401561-ACT

MBD2 umano (methyl-CpG binding domain protein 2) è una proteina “lettrice” della metilazione del DNA che si lega ai dinucleotidi CpG metilati e contribuisce a tradurre i segni epigenetici in esiti trascrizionali. Attraverso interazioni con complessi di rimodellamento della cromatina e con complessi di deacetilasi istoniche come NuRD, MBD2 partecipa al silenziamento genico, alla compattazione della cromatina e alla regolazione di programmi specifici di linea cellulare. Influenza processi quali la differenziazione cellulare, la segnalazione immunitaria e il mantenimento della stabilità epigenetica a livello genomico. Un’attività di MBD2 deregolata e un’alterata repressione dipendente dalla metilazione sono state associate a reti trascrizionali aberranti osservate nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da squilibri epigenetici.

MBD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MBD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MBD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MBD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MBD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MBD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MBD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MBD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MBD2 nelle cellule tumorali con espressione di MBD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.