matrin-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418085-LAC

MATR3 codifica la matrina-3, una proteina della matrice nucleare legante RNA/DNA implicata nell’organizzazione dell’architettura nucleare e nella regolazione dei programmi di espressione genica tramite processamento dell’RNA, stabilizzazione e trasporto nucleocitoplasmatico. La matrina-3 si associa a complessi ribonucleoproteici e influenza lo splicing del pre‑mRNA e la regolazione trascrizionale, collegandosi a vie che governano la manutenzione del genoma e il metabolismo dell’RNA in risposta allo stress. La deregolazione o le mutazioni di MATR3 sono state associate a fenotipi neurodegenerativi, inclusi SLA e miopatia distale, evidenziandone la rilevanza per studi sull’omeostasi neuronale e sulla biologia delle proteine leganti l’RNA. In quanto fattore nucleare ampiamente espresso, la matrina-3 viene spesso studiata nel contesto della proteostasi, di assemblaggi RNP separati in fase e della vulnerabilità specifica di alcuni tipi cellulari ai difetti di processamento dell’RNA.

Le particelle di attivazione lentivirale matrin-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MATR3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale matrin-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MATR3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di matrin-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MATR3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.