MATE2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404811-ACT

Il gene umano **SLC47A2** codifica il trasportatore di estrusione di farmaci e tossine **MATE2** (SLC47A2), un antiporto elettro-neutro per cationi organici/H+ che media l’efflusso di metaboliti endogeni e di cationi xenobiotici attraverso le membrane epiteliali. MATE2 è associato in modo particolarmente evidente al trasporto nel tubulo prossimale renale, dove agisce in sinergia con trasportatori di uptake come **OCT2** per coordinare la secrezione vettoriale dei cationi organici e modulare l’esposizione cellulare a composti carichi. Controllando l’accumulo intracellulare di substrati cationici, **SLC47A2** influenza la variabilità farmacocinetica, le interazioni tra trasportatori e le risposte allo stress associate a un’alterata capacità di trasporto epiteliale. Un’espressione deregolata o variazioni funzionali di **SLC47A2** risultano quindi rilevanti per studi di fisiologia renale, vie di destino dei farmaci e suscettibilità, mediata dai trasportatori, a fenotipi di danno renale in modelli sperimentali.

MATE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC47A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MATE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC47A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC47A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MATE2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC47A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MATE2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MATE2 nelle cellule tumorali con espressione di SLC47A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.