MATE1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403332-LAC

Il gene umano SLC47A1 codifica la proteina 1 di estrusione di farmaci e tossine (MATE1), un antiporto apicale H+/catione organico che media un efflusso dipendente dal pH di metaboliti endogeni e di cationi organici xenobiotici. MATE1 opera nelle reti di trasporto epiteliale, coordinandosi con i trasportatori di uptake nel tubulo prossimale renale e nelle vie epato-biliari per regolare la clearance cellulare e la distribuzione sistemica dei composti cationici. Le varianti o l’alterata espressione di SLC47A1 possono modificare l’esposizione intracellulare ai substrati e vengono studiate nel contesto della fisiologia del trasporto renale ed epatico, dei meccanismi di interazione farmaco–farmaco e della suscettibilità alla tossicità. In quanto trasportatore in tessuti barriera chiave, MATE1 è spesso analizzato in modelli di stress tubulare, perturbazioni metaboliche e segnalazione infiammatoria che influenzano la regolazione dei trasportatori di membrana.

Le particelle di attivazione lentivirale MATE1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLC47A1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MATE1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLC47A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MATE1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLC47A1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.