MAP-1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400981-ACT

Il gene umano **MAP1B** codifica la proteina associata ai microtubuli 1B (MAP-1B), un regolatore del citoscheletro che si lega ai microtubuli e ne promuove la stabilizzazione e il rimodellamento dinamico durante lo sviluppo neuronale. MAP-1B sostiene la crescita degli assoni, la guida del cono di crescita e l’estensione dei neuriti coordinando il crosstalk tra microtubuli e actina e i processi di trasporto intracellulare necessari per un’architettura cellulare polarizzata. La sua attività si interseca con programmi di segnalazione che modulano l’organizzazione del citoscheletro, incluse le vie che regolano la neuritogenesi e la maturazione sinaptica. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di MAP1B sono state associate a fenotipi neuro-sviluppativi e a disfunzioni cellulari rilevanti per patologie neurologiche, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla struttura e la connettività neuronale.

MAP-1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAP-1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAP-1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAP-1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAP-1B nelle cellule tumorali con espressione di MAP1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.