MagT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404484-LAC

MAGT1 codifica MagT1, un trasportatore di magnesio localizzato nella membrana del reticolo endoplasmatico che contribuisce all’omeostasi intracellulare di Mg2+ e supporta processi enzimatici e di segnalazione dipendenti dal Mg2+. Oltre al trasporto ionico, MagT1 è stato collegato al controllo di qualità della N-glicosilazione tramite interazioni con i complessi dell’oligosaccariltransferasi, influenzando la maturazione delle proteine e la proteostasi del RE. L’alterazione di MAGT1 è associata a fenotipi di disfunzione immunitaria e a un’attivazione linfocitaria modificata, in linea con ruoli nella segnalazione calcio/magnesio-dipendente e in vie sensibili allo stato redox. Di conseguenza, MAGT1 viene studiato nel contesto dell’immunobiologia, della glicosilazione proteica e delle risposte cellulari allo stress, rilevanti per modelli di ricerca su infiammazione e infezioni.

Le particelle di attivazione lentivirale MagT1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MAGT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MagT1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MAGT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MagT1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MAGT1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.