MAGOH Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402667-ACT

MAGOH (mago homolog, subunità del complesso di giunzione degli esoni) è una proteina legante l’RNA conservata che funge da componente centrale del complesso di giunzione degli esoni, coordinando la regolazione genica post-trascrizionale. Partecipa allo splicing dell’mRNA, alla sua esportazione e localizzazione e alla degradazione dell’mRNA mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay), influenzando così il controllo di qualità del trascrittoma e l’integrità del proteoma. Attraverso questi processi, MAGOH contribuisce alla progressione del ciclo cellulare e ai programmi di neurosviluppo, modulando l’espressione di geni coinvolti in proliferazione e differenziamento. Alterazioni del dosaggio o deregolazioni dei componenti del complesso di giunzione degli esoni, incluso MAGOH, sono state collegate a meccanismi patogenetici nei disturbi dello sviluppo e a cambiamenti dell’espressione genica associati al cancro, rendendolo un nodo utile per studiare il metabolismo dell’RNA in contesti rilevanti per la malattia.

MAGOH Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAGOH senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAGOH Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAGOH nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAGOH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAGOH. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAGOH nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAGOH nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAGOH nelle cellule tumorali con espressione di MAGOH silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.