MAfF Plasmide Double Nickase (h): sc-411785-NIC

MAFF codifica MAfF, un fattore di trascrizione small Maf con dominio basic leucine zipper (bZIP) che è privo di un dominio di transattivazione canonico e in genere funziona come partner di dimerizzazione obbligato per le proteine CNC e altre bZIP. Attraverso l’eterodimerizzazione con fattori quali NFE2L2/NRF2, MAfF contribuisce alla regolazione della trascrizione guidata dagli elementi di risposta antiossidante (ARE) e integra programmi cellulari che controllano l’omeostasi redox, il metabolismo degli xenobiotici e la segnalazione infiammatoria. L’attività di MAfF è quindi collegata all’adattamento allo stress ossidativo e alla riprogrammazione trascrizionale in contesti che includono la disregolazione metabolica e la biologia tumorale. Un’alterata espressione di MAFF è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto della sua utilità come nodo per analizzare le reti di risposta allo stress e i circuiti di regolazione genica a valle.

MAfF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAFF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAFF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAFF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAFF interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.