MafA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401480

Panoramica

MAFA codifica il fattore di trascrizione MafA, una proteina “basic leucine zipper” che si lega agli elementi di riconoscimento MAF per regolare programmi di espressione genica coinvolti nella differenziazione cellulare e nella trascrizione in risposta agli stimoli. Nella biologia delle isole pancreatiche umane, MafA è associato alla regolazione della trascrizione del gene dell’insulina e a reti più ampie che coordinano la segnalazione responsiva al glucosio, la funzione della via secretoria e il mantenimento dell’identità delle cellule endocrine. Alterazioni dell’attività di MAFA sono state collegate a stati di espressione genica disregolati nelle cellule beta e a una ridotta produzione di insulina, rendendolo rilevante per studi sui meccanismi legati al diabete e sulle risposte allo stress delle isole. Al di fuori del pancreas, il controllo trascrizionale dipendente da MafA rappresenta un modello per indagare l’uso di enhancer specifici di tessuto e la regolazione dei geni metabolici guidata dai fattori di trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MafA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAFA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAFA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAFA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MafA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAFA per lo studio della segnalazione di MafA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAFA critici per la funzione di MafA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAFA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MafA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MafA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAFA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MafA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MafA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAFA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAFA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.