Mad 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421519

Panoramica

Mxd1 (Mad1) codifica un regolatore trascrizionale di tipo basic helix–loop–helix leucine zipper che antagonizza l’espressione genica guidata da MYC associandosi a MAX e reclutando complessi corepressori. Attraverso questa rete MYC–MAX–MAD, Mad1 contribuisce a programmi di repressione trascrizionale che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il metabolismo cellulare. Nei sistemi murini, l’alterazione dell’attività di Mxd1 viene studiata in contesti in cui la segnalazione di MYC è deregolata, inclusi la trasformazione oncogenica, fenotipi ematopoietici e il patterning dello sviluppo. La regolazione dipendente da Mad1 della cromatina e dell’output della RNA polimerasi II ne fa un nodo utile per distinguere stati trascrizionali proliferativi rispetto a quelli differenziativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mad 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mxd1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mxd1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mxd1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mad 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mxd1 per lo studio della segnalazione di Mad 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mxd1 critici per la funzione di Mad 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mxd1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mad 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mad 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mxd1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mad 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mad 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mxd1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mxd1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.