MacroH2A Plasmide Double Nickase (h): sc-407013-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MacroH2A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MacroH2A Double Nickase Plasmid (h) e il MacroH2A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira H2AFY2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MacroH2A Antibody (C-9): sc-377452
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MacroH2A Plasmide Double Nickase (h) | sc-407013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MacroH2A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2AFY2 codifica macroH2A, una variante dell’istone H2A che contribuisce a stabilire stati cromatinici specializzati e a modulare l’output trascrizionale in tutto il genoma. La deposizione di macroH2A è collegata alla memoria epigenetica, alla regolazione della cromatina associata al cromosoma X e alla repressione genica stabile, intersecando vie che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’impegno di linea e la trascrizione in risposta allo stress. Influenzando la dinamica dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina, macroH2A contribuisce alla regolazione di processi dipendenti dal DNA, inclusi la riparazione del DNA e la tempistica della replicazione. Uno squilibrio nella proporzione delle isoforme di macroH2A e nella sua occupazione della cromatina è stato associato ad alterati programmi di differenziamento e a fenotipi trascrizionali rilevanti per il cancro, rendendo H2AFY2 un bersaglio di interesse nella ricerca in epigenetica e biologia tumorale.
MacroH2A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus H2AFY2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di H2AFY2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di H2AFY2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con H2AFY2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.