mAChR M5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402943

Panoramica

CHRM5 codifica il recettore muscarinico dell’acetilcolina M5 (mAChR M5), un recettore accoppiato a proteine G che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la produzione di fosfati dell’inositolo, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e vie dipendenti dalla PKC. Attraverso queste cascate di secondi messaggeri, mAChR M5 modula l’eccitabilità neuronale, la trasmissione sinaptica e il tono vascolare, e può attivare anche la via MAPK/ERK con effetti a valle sui programmi di espressione genica. CHRM5 è espresso in popolazioni cellulari discrete, neurali e periferiche, dove la regolazione colinergica interseca i circuiti dopaminergici e la regolazione neurovascolare. Una segnalazione muscarinica disregolata è stata implicata in fenotipi neuropsichiatrici e neurologici, supportando l’uso di modelli di perturbazione di CHRM5 per analizzare il contributo delle vie colinergiche a processi cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHRM5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHRM5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHRM5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mAChR M5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHRM5 per lo studio della segnalazione di mAChR M5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHRM5 critici per la funzione di mAChR M5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHRM5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mAChR M5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal mAChR M5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHRM5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mAChR M5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR mAChR M5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHRM5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHRM5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.