mAChR M5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402943
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- mAChR M5 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico mAChR M5, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
mAChR M5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402943 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CHRM5 codifica o receptor muscarínico de acetilcolina M5 (mAChR M5), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular a sinalização da fosfolipase C, a produção de fosfatos de inositol, a mobilização de Ca2+ intracelular e vias dependentes de PKC. Por meio dessas cascatas de segundos mensageiros, o mAChR M5 modula a excitabilidade neuronal, a sinalização sináptica e o tônus vascular, e pode ativar a sinalização MAPK/ERK com efeitos a jusante sobre programas de expressão gênica. O CHRM5 é expresso em populações celulares discretas no sistema nervoso e em tecidos periféricos, onde a regulação colinérgica se cruza com circuitos dopaminérgicos e com a regulação neurovascular. A desregulação da sinalização muscarínica tem sido implicada em fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos, sustentando o uso de modelos de perturbação de CHRM5 para dissecar as contribuições das vias colinérgicas para processos celulares relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO mAChR M5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CHRM5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CHRM5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CHRM5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína mAChR M5.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CHRM5 para a investigação da sinalização de mAChR M5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CHRM5 críticos para a função mAChR M5
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CHRM5 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo mAChR M5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo mAChR M5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CHRM5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo mAChR M5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR mAChR M5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CHRM5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CHRM5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.