M-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401232-ACT

CDH15 codifica la M-caderina, un recettore di adesione cellula-cellula calcio-dipendente arricchito nelle cellule della linea muscolare scheletrica e coinvolto nel riconoscimento, nella fusione dei mioblasti e nel mantenimento dell’architettura tissutale. Attraverso l’adesione omofilica e l’accoppiamento alle catenine, la M-caderina sostiene l’assemblaggio delle giunzioni aderenti, l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione dipendente dal contatto, che influenza la differenziazione e le risposte rigenerative. L’attività di CDH15 interseca vie che regolano la migrazione cellulare e la dinamica di membrana durante la miogenesi, e un’espressione alterata è stata riportata in contesti di degenerazione/rigenerazione muscolare e in fenotipi di adesione delle cellule tumorali. Queste caratteristiche rendono CDH15 un bersaglio utile per studiare la regolazione, dipendente dall’adesione, dell’impegno di linea e del rimodellamento tissutale in modelli cellulari umani.

M-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

M-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di M-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da M-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via M-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.