LysRS Plasmide Double Nickase (h): sc-404110-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LysRS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LysRS Double Nickase Plasmid (h) e il LysRS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KARS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LysRS Antibody (A-10): sc-271331
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LysRS Plasmide Double Nickase (h) | sc-404110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LysRS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KARS codifica la lisil-tRNA sintetasi umana (LysRS), una aminoacil-tRNA sintetasi di classe II che lega la lisina al suo tRNA cognato (tRNA^Lys), garantendo la fedeltà della traduzione e sostenendo l’omeostasi del proteoma. Oltre al suo ruolo canonico nella sintesi proteica citosolica, LysRS è stata implicata in processi legati alla segnalazione tramite una localizzazione regolata e interazioni proteina–proteina che collegano la traduzione alle risposte cellulari allo stress. L’alterazione della funzione delle aminoacil-tRNA sintetasi può modificare la proteostasi, la segnalazione integrata dello stress e i programmi di stato cellulare, spesso studiati in modelli di neurosviluppo, neurodegenerazione e biologia del cancro. Un’attività o un’espressione deregolata di KARS è inoltre rilevante per il coordinamento mitocondrio–citosol dell’espressione genica e per l’adattamento metabolico, rendendolo un nodo utile per lo studio di meccanismi incentrati sulla traduzione.
LysRS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KARS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KARS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KARS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KARS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.