LYPD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408607-ACT

LYPD2 (Ly6/PLAUR domain containing 2) codifica una proteina di superficie cellulare ancorata al GPI della famiglia Ly6/uPAR, implicata nella modulazione delle interazioni con ligandi extracellulari e della segnalazione prossimale alla membrana. In quanto membro della superfamiglia Ly6, LYPD2 è associata a processi che influenzano l’adesione cellulare, l’organizzazione dei recettori e la trasduzione del segnale dipendente dal contesto a livello della membrana plasmatica. I pattern di espressione nei tessuti epiteliali e in quelli associati al sistema nervoso suggeriscono ruoli nella differenziazione e nell’omeostasi tissutale, mentre una sua disregolazione è stata riportata in studi di profilazione molecolare del cancro e di altre malattie complesse. Queste caratteristiche rendono LYPD2 rilevante per indagare la regolazione dello stato cellulare, le reti di proteine di superficie e il rimodellamento delle vie di segnalazione nei modelli di malattia.

LYPD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LYPD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LYPD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LYPD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LYPD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LYPD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LYPD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LYPD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LYPD2 nelle cellule tumorali con espressione di LYPD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.