Ly6G6d Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403030-ACT

LY6G6D codifica Ly6G6d, un membro della famiglia Ly6/uPAR ancorato alla glicosilfosfatidilinositolo (GPI), arricchito in contesti immuno-correlati e ritenuto capace di influenzare le interazioni cellula–cellula a livello della membrana plasmatica. In quanto proteina associata alla superficie cellulare, Ly6G6d viene studiata per il suo ruolo nel modulare la trasduzione del segnale, l’organizzazione dei microdomini di membrana e la comunicazione tra cellule immunitarie in microambienti infiammatori e associati ai tumori. Un’alterata espressione di LY6G6D è stata riportata in molteplici dataset di oncologia e immuno-oncologia, supportandone l’impiego come marcatore molecolare negli studi sull’infiltrazione immunitaria e sul crosstalk epitelio–immunitario. Queste caratteristiche rendono LY6G6D un bersaglio rilevante per analizzare le vie che collegano la regolazione degli antigeni di superficie alla segnalazione immunitaria e a programmi trascrizionali associati alla malattia.

Ly6G6d Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LY6G6D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ly6G6d Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LY6G6D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LY6G6D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ly6G6d. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LY6G6D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ly6G6d nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ly6G6d nelle cellule tumorali con espressione di LY6G6D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.