Ly-6D Plasmide Double Nickase (h): sc-407742-NIC

LY6D codifica Ly-6D, una proteina di superficie cellulare ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) della superfamiglia Ly6/uPAR, implicata nella specificazione delle linee epiteliali e nei fenotipi cellulari associati al sistema immunitario. Ly-6D partecipa a programmi di interazione cellula–cellula e può influenzare reti di segnalazione legate a differenziamento, adesione e organizzazione dei microdomini di membrana. Un’espressione deregolata di LY6D è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso valutata come marcatore di stati epiteliali o ristretti a una specifica linea cellulare, rendendola rilevante per studi sull’eterogeneità tumorale e sulle transizioni di stato cellulare. Inoltre, la biologia di LY6D è di interesse per indagare come le proteine ancorate a GPI modulino la prossimità dei recettori e la responsività delle vie a valle a livello della membrana plasmatica.

Ly-6D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LY6D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LY6D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LY6D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LY6D interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.