LSD1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430289-NIC

Il gene murino **Kdm1a** codifica la demetilasi lisina-specifica 1 (LSD1), un enzima della cromatina dipendente da FAD che rimuove i segni di mono- e dimetilazione da H3K4 e, in determinati contesti, da H3K9. Attraverso interazioni con CoREST/HDAC e altri complessi di coregolatori trascrizionali, LSD1 coordina gli stati di enhancer e promotori che controllano la scelta di linea cellulare, i programmi del ciclo cellulare e la differenziazione. L’attività di LSD1 collega il rimodellamento epigenetico alle reti di segnalazione e trascrizionali che governano il mantenimento delle cellule staminali, l’espressione genica nello sviluppo neurobiologico e la maturazione delle cellule immunitarie. La disregolazione della repressione o dell’attivazione della cromatina dipendente da LSD1 è stata associata a proliferazione aberrante e a stati di differenziazione alterati in molteplici modelli biologici rilevanti per la patologia, supportandone l’uso come nodo meccanicistico nella ricerca in epigenetica.

LSD1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kdm1a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kdm1a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kdm1a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kdm1a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.