LSD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401294-NIC

KDM1A codifica la demetilasi lisina-specifica 1 (LSD1), un’ammino-ossidasi FAD-dipendente che rimuove i segni di mono- e di-dimetilazione dall’istone H3 (principalmente H3K4 e, a seconda del contesto, H3K9) per modulare l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. LSD1 agisce all’interno di complessi corepressori e di rimodellamento della cromatina quali CoREST e NuRD, collegando la demetilazione degli istoni alla metilazione del DNA, alla regolazione degli enhancer e all’espressione genica specifica di linea. Attraverso questi meccanismi epigenetici, LSD1 influenza la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il mantenimento di stati con caratteristiche staminali. Un’attività deregolata di KDM1A e alterazioni nella composizione dei complessi di LSD1 sono state associate a un controllo trascrizionale aberrante in molteplici tumori e in altri disturbi che coinvolgono una disregolazione epigenetica.

LSD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.