Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LMP7 Plasmide Double Nickase (h): sc-402382-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LMP7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LMP7 Double Nickase Plasmid (h) e il LMP7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PSMB8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LMP7 Antibody (A-12): sc-365699
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LMP7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402382-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMP7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402382-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano PSMB8 codifica LMP7, una subunità β catalitica dell’immunoproteasoma inducibile dall’interferone-γ, che sostituisce la subunità costitutiva del proteasoma PSMB5 modificando la specificità proteolitica. LMP7 contribuisce alla funzione del sistema ubiquitina–proteasoma plasmando la generazione di peptidi per l’elaborazione degli antigeni di classe I dell’MHC, influenzando così la sorveglianza immunitaria adattativa e la segnalazione infiammatoria. Il rimodellamento dell’attività del proteasoma tramite l’induzione di PSMB8 è collegato alla differenziazione delle cellule immunitarie e alle risposte allo stress, e la disregolazione della composizione dell’immunoproteasoma è stata associata a stati infiammatori cronici e autoimmunità. Varianti patogene di PSMB8 sono state inoltre collegate a fenotipi autoinfiammatori caratterizzati da segnalazione citochinica aberrante e da un’alterata proteostasi.
LMP7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PSMB8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PSMB8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PSMB8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PSMB8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.