LMP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401615-NIC

PSMB9 codifica la subunità catalitica dell’immunoproteasoma umano LMP2 (β1i), che sostituisce la subunità costitutiva β1 in risposta all’interferone-γ e ad altri segnali infiammatori. LMP2 contribuisce alla proteolisi dipendente dall’ubiquitina e modella il repertorio di peptidi generato per l’elaborazione e la presentazione dell’antigene tramite MHC di classe I, influenzando così il riconoscimento da parte delle cellule T CD8+. Attraverso il suo ruolo nell’assemblaggio dell’immunoproteasoma e nelle preferenze di taglio proteasomiale, PSMB9 collega la segnalazione infiammatoria innata alla sorveglianza immunitaria adattativa e all’omeostasi delle proteine cellulari. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di PSMB9 sono state associate a una presentazione dell’antigene disfunzionale e a fenotipi infiammatori rilevanti per autoimmunità, biologia delle infezioni e interazioni immunitarie nei tumori.

LMP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PSMB9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PSMB9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PSMB9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PSMB9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.