LMP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401615-ACT

PSMB9 codifica la subunità catalitica dell’immunoproteasoma LMP2 (β1i), un componente chiave dei proteasomi inducibili dall’interferone-γ che rimodellano la specificità proteolitica per generare peptidi antigenici destinati alla presentazione tramite MHC di classe I. Regolando il turnover proteico e la composizione dell’immunopeptidoma, LMP2 influenza la segnalazione immunitaria innata e adattativa, le risposte infiammatorie e l’adattamento cellulare allo stress. Un’alterata attività di PSMB9 è stata associata a una presentazione dell’antigene disfunzionale e a vie aberranti guidate dalle citochine, rilevanti per l’autoimmunità, l’infiammazione cronica e i meccanismi di evasione immunitaria osservati nella biologia dei tumori. Come parte del più ampio sistema ubiquitina–proteasoma, LMP2 offre un punto di ingresso meccanicistico per studiare il dialogo tra proteostasi e immunità e le reti di geni stimolati dall’interferone.

LMP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMB9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LMP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMB9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMB9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LMP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMB9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LMP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LMP2 nelle cellule tumorali con espressione di PSMB9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.