LBX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406846

Panoramica

LBX1 (ladybird homeobox 1) codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola la formazione dei pattern embrionali e la specificazione delle linee cellulari, con ruoli di rilievo nella differenziazione degli interneuroni del midollo spinale e nella migrazione dei precursori del muscolo scheletrico. Attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico, LBX1 contribuisce a coordinare programmi trascrizionali che modellano lo sviluppo dorsoventrale del tubo neurale e le vie miogeniche durante la somitogenesi. Varianti genetiche e un’alterata regolazione di LBX1 sono state associate a fenotipi dello sviluppo, inclusa la suscettibilità alla scoliosi idiopatica adolescenziale, evidenziandone la rilevanza per la ricerca muscoloscheletrica e neuroevolutiva. Nei modelli cellulari, LBX1 viene comunemente studiato per il suo impatto sullo stato di differenziazione, sul mantenimento dell’identità cellulare e sulle reti trascrizionali a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LBX1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LBX1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LBX1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LBX1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LBX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LBX1 per lo studio della segnalazione di LBX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LBX1 critici per la funzione di LBX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LBX1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LBX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LBX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LBX1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LBX1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LBX1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LBX1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LBX1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.