LAMP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400120

Panoramica

LAMP1 (lysosomal associated membrane protein 1) è una principale glicoproteina di membrana di tipo I degli endosomi tardivi e dei lisosomi, che contribuisce a mantenere l’integrità lisosomiale e partecipa al traffico vescicolare, alla fusione endosoma–lisosoma e al flusso autofagia–lisosoma. Contribuendo al posizionamento dei lisosomi, alla protezione della membrana e alla capacità degradativa, LAMP1 influenza la presentazione dell’antigene, il turnover delle proteine di membrana e le risposte cellulari allo stress da carenza di nutrienti. Alterazioni dell’abbondanza o della localizzazione di LAMP1 sono spesso utilizzate come indicatore della biogenesi lisosomiale e delle risposte allo stress, e sono collegate a vie rilevanti per la neurodegenerazione, le infezioni e l’adattamento delle cellule tumorali. LAMP1 è inoltre comunemente impiegata come marcatore lisosomiale negli studi sulla dinamica degli organelli e sulle reti di segnalazione associate ai lisosomi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LAMP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LAMP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LAMP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LAMP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LAMP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LAMP1 per lo studio della segnalazione di LAMP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LAMP1 critici per la funzione di LAMP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LAMP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LAMP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LAMP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LAMP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LAMP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LAMP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LAMP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LAMP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.