LAMP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400120

Übersicht

LAMP1 (lysosomales assoziiertes Membranprotein 1) ist ein wichtiges Typ‑I‑Membranglykoprotein später Endosomen und Lysosomen, das zur Aufrechterhaltung der lysosomalen Integrität beiträgt und an vesikulärem Transport, Endosomen‑Lysosomen‑Fusion sowie dem Autophagie‑Lysosomen‑Flux beteiligt ist. Indem LAMP1 zur Positionierung der Lysosomen, zum Membranschutz und zur Abbaukapazität beiträgt, beeinflusst es die Antigenprozessierung, den Umsatz von Membranproteinen und zelluläre Antworten auf Nährstoffstress. Veränderte LAMP1‑Mengen oder eine veränderte Lokalisation werden häufig als Readout für lysosomale Biogenese und Stressantworten verwendet und sind mit Signalwegen verknüpft, die für Neurodegeneration, Infektionen und die Anpassung von Krebszellen relevant sind. Außerdem wird LAMP1 in Studien zur Organell‑Dynamik und zu lysosomenbezogenen Signalnetzwerken häufig als Lysosomenmarker eingesetzt.

Das LAMP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LAMP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LAMP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LAMP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LAMP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LAMP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LAMP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LAMP1-Exone abzielen, die für die LAMP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LAMP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LAMP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LAMP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LAMP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LAMP1 HDR-Plasmid (h) und LAMP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LAMP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LAMP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.