Laminin α-4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401801-NIC

LAMA4 codifica la laminina α-4, una subunità chiave della matrice extracellulare che si assembla in eterotrimeri di laminina all’interno delle membrane basali e modula l’adesione cellula–matrice e la segnalazione. La laminina α-4 sostiene le interazioni tra endotelio e muscolo liscio, contribuisce all’organizzazione della membrana basale vascolare e influenza migrazione, polarità e sopravvivenza attraverso vie associate a integrine e distroglicano, che interagiscono con la segnalazione delle adesioni focali. Alterazioni dell’espressione di LAMA4 o della composizione della membrana basale sono state collegate a una deregolazione dell’angiogenesi, dell’infiammazione e del rimodellamento in patologie cardiometaboliche e vascolari, e si osservano anche nel microambiente tumorale e nei processi stromali. Come componente della matrice, la laminina α-4 offre un punto di accesso meccanicistico per studiare come i segnali extracellulari regolino l’architettura tissutale e la funzione di barriera.

Laminin α-4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.