Laminin α-2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421375-ACT

Lama2 codifica la laminina α-2, una subunità chiave di glicoproteina della matrice extracellulare che si assembla nelle isoforme laminina-211/221 all’interno delle membrane basali del muscolo scheletrico, del nervo periferico e di altri tessuti. La laminina α-2 sostiene l’adesione cellula–matrice e l’organizzazione del citoscheletro attraverso interazioni con integrine e distroglicano, influenzando la segnalazione delle adesioni focali, la meccanotrasduzione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Nei sistemi murini, la funzione di Lama2 è strettamente legata alla stabilità del sarcolemma e all’integrità delle miofibre, e un’alterata espressione della laminina α-2 perturba l’architettura della membrana basale e l’omeostasi tissutale. Queste caratteristiche rendono Lama2 un utile punto di ingresso per studiare la regolazione della miogenesi guidata dalla matrice extracellulare, le interazioni assone–cellula di Schwann e le risposte allo stress nei microambienti del tessuto connettivo.

Laminin α-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Lama2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin α-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Lama2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Lama2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin α-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Lama2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin α-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin α-2 nelle cellule tumorali con espressione di Lama2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.