KCNQ3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403544

Panoramica

KCNQ3 codifica la subunità Kv7.3 dei canali del potassio voltaggio-dipendenti che veicolano la corrente M neuronale, un regolatore chiave dell’eccitabilità di membrana e dell’adattamento della frequenza di scarica. Modellando le conduttanze sub-soglia, KCNQ3 partecipa a vie che controllano la soglia del potenziale d’azione, l’integrazione sinaptica e le oscillazioni di rete, spesso in concertazione con complessi di canali contenenti KCNQ2. L’alterazione delle correnti mediate da KCNQ3 modifica la dinamica di firing neuronale ed è stata associata a fenotipi neuroevolutivi ed epilettici, rendendolo rilevante per studi sulla funzione dei circuiti corticali. KCNQ3 è anche utilizzato come bersaglio di lettura funzionale nei flussi di lavoro di farmacologia dei canali ionici ed elettrofisiologia che analizzano la segnalazione legata all’eccitabilità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNQ3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNQ3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNQ3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNQ3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCNQ3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNQ3 per lo studio della segnalazione di KCNQ3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNQ3 critici per la funzione di KCNQ3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNQ3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCNQ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCNQ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNQ3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCNQ3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCNQ3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNQ3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNQ3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.