KCNH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405756-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KCNH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KCNH1 Double Nickase Plasmid (h) e il KCNH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KCNH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KCNH1 Antibody (C-11): sc-398585
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KCNH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KCNH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNH1 codifica il canale del potassio voltaggio-dipendente Kv10.1 (Eag1), una proteina di membrana che contribuisce a definire il potenziale di membrana a riposo e le dinamiche di ripolarizzazione, regolando così l’eccitabilità cellulare. Controllando il flusso di K⁺, KCNH1 influenza la segnalazione calcio-dipendente, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di migrazione, che si intersecano con vie dipendenti dal potenziale di membrana. Un’attività alterata di KCNH1 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e a una segnalazione proliferativa deregolata in molteplici contesti sperimentali, rendendolo un bersaglio utile per studiare come la funzione dei canali ionici si integri con stati trascrizionali e metabolici. Nelle cellule umane, KCNH1 offre un sistema maneggevole per collegare le proprietà elettrofisiologiche alle reti di segnalazione a valle e ai risultati fenotipici.
KCNH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.