JMJD4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406639

Panoramica

JMJD4 codifica una ossigenasi dipendente dal 2-ossoglutarato contenente un dominio JmjC, implicata in reazioni di idrossilazione post-traduzionale che possono influenzare la stabilità e la funzione delle proteine. L’attività di JMJD4 è stata collegata alla regolazione di processi legati alla traduzione attraverso la modifica di fattori ribosomiali e di legame all’RNA, con effetti a valle sulla proteostasi e sulle risposte cellulari allo stress. Collegando la chimica delle ossigenasi al controllo dell’espressione genica, JMJD4 viene studiata in vie che coinvolgono il sensing metabolico, la segnalazione associata all’ipossia e il rimodellamento adattativo del macchinario di traduzione. La disregolazione di questi processi è rilevante in stati proliferativi e adattati allo stress, rendendo JMJD4 un bersaglio utile per studi meccanicistici in biologia del cancro e in programmi correlati di controllo trascrizionale/traslazionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene JMJD4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del JMJD4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto JMJD4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JMJD4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di JMJD4 per lo studio della segnalazione di JMJD4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni JMJD4 critici per la funzione di JMJD4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di JMJD4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JMJD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JMJD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus JMJD4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JMJD4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JMJD4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia JMJD4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio JMJD4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.