JMJD3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401883-ACT

Il gene umano **KDM6B** codifica la demetilasi delle lisine istoniche **JMJD3**, un enzima dipendente da **Fe(II)** e **2-ossoglutarato** che rimuove i segni repressivi **H3K27me3** per promuovere programmi trascrizionali legati alle transizioni del destino cellulare. JMJD3 si integra con il rimodellamento della cromatina e con reti geniche regolate da Polycomb per controllare l’impegno di linea, l’espressione di geni infiammatori e la trascrizione responsiva agli stimoli. Attraverso questi meccanismi epigenetici, KDM6B contribuisce alla regolazione della differenziazione, della senescenza e delle vie di segnalazione immunitaria, rendendolo rilevante per studi su disturbi dello sviluppo, riprogrammazione trascrizionale associata al cancro e stati infiammatori cronici. L’alterazione dell’attività o dell’espressione di JMJD3 può modificare i paesaggi di enhancer e promotori, influenzando vie a valle come la trascrizione responsiva a **NF-κB** e programmi oncogenici o oncosoppressivi dipendenti dal contesto.

JMJD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KDM6B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JMJD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KDM6B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KDM6B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JMJD3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KDM6B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JMJD3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JMJD3 nelle cellule tumorali con espressione di KDM6B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.