JMJD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401883-ACT

O KDM6B humano codifica a desmetilase de lisina de histonas JMJD3, uma enzima dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que remove marcas repressoras H3K27me3 para promover programas transcricionais ligados a transições de destino celular. A JMJD3 integra-se a redes de remodelamento de cromatina e de genes regulados por Polycomb para controlar o comprometimento de linhagem, a expressão de genes inflamatórios e a transcrição responsiva a estímulos. Por meio desses mecanismos epigenéticos, o KDM6B contribui para a regulação da diferenciação, da senescência e de vias de sinalização imune, tornando-se relevante para estudos de distúrbios do desenvolvimento, reprogramação transcricional associada ao câncer e estados inflamatórios crônicos. A perturbação da atividade ou da expressão de JMJD3 pode alterar as paisagens de enhancers e promotores, influenciando vias a jusante como a transcrição responsiva a NF-κB e programas oncogênicos ou supressores de tumor dependentes do contexto.

JMJD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM6B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JMJD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM6B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM6B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JMJD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM6B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JMJD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JMJD3 em células tumorais com expressão de KDM6B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.