JMJD2C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403282-ACT

KDM4C (JMJD2C) codifica una demetilasi istonica contenente il dominio Jumonji C (JmjC) che rimuove principalmente segni metilici repressivi come H3K9me3/me2, favorendo l’apertura della cromatina e la competenza trascrizionale. Attraverso la regolazione dinamica della metilazione degli istoni, JMJD2C influenza il controllo epigenetico di programmi di espressione genica legati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e a reti trascrizionali specifiche di linea cellulare. Un’attività deregolata di KDM4C è stata associata a stati di cromatina aberranti osservati in diversi tumori, in cui un’accessibilità alterata di enhancer e promotori può rafforzare circuiti trascrizionali oncogenici. In quanto regolatore nucleare della cromatina, JMJD2C è frequentemente studiato per i suoi ruoli nella cooperazione con fattori di trascrizione, nel rimodellamento della cromatina e nel mantenimento della plasticità epigenetica nelle cellule umane.

JMJD2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KDM4C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JMJD2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KDM4C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KDM4C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JMJD2C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KDM4C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JMJD2C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JMJD2C nelle cellule tumorali con espressione di KDM4C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.