JMJD2A Plasmide Double Nickase (m): sc-432966-NIC

Il gene murino **Kdm4a** codifica la demetilasi delle lisine **JMJD2A (KDM4A)**, un enzima contenente il dominio **Jumonji C** che rimuove marcatori istonici repressivi quali **H3K9me3/me2** e **H3K36me3/me2**, regolando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. JMJD2A partecipa al controllo epigenetico della progressione del ciclo cellulare, della replicazione e riparazione del DNA e dell’espressione genica specifica di linea, integrandosi con il rimodellamento della cromatina e con reti di fattori di trascrizione. Attraverso i suoi effetti sull’organizzazione dell’eterocromatina e sulla stabilità del genoma, **Kdm4a** è spesso studiato in vie collegate a stati trascrizionali oncogenici, proliferazione aberrante e risposte allo stress. Un’attività deregolata di JMJD2A è stata associata ad alterazioni della differenziazione e a fenotipi di trasformazione, supportandone l’uso come nodo meccanicistico nella ricerca epigenomica rilevante per le malattie.

JMJD2A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kdm4a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kdm4a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kdm4a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kdm4a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.