Islet-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421157

Panoramica

Il gene Isl1 del topo codifica il fattore di trascrizione LIM-homeodomain Islet-1 (ISL1), un regolatore chiave della specificazione di linea e della differenziazione durante lo sviluppo del sistema nervoso, del pancreas e dei tessuti cardiovascolari. ISL1 coordina programmi trascrizionali che controllano il mantenimento dei progenitori, le decisioni di destino cellulare e la maturazione, agendo attraverso interazioni dipendenti dal contesto con cofattori leganti i domini LIM e con reti di geni homeobox. Nella biologia delle isole pancreatiche, Isl1 sostiene l’espressione di geni endocrini e la maturazione funzionale, mentre nei progenitori dei motoneuroni e cardiaci contribuisce al patterning e alla morfogenesi. Un’attività di ISL1 deregolata è quindi rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione delle isole correlata al diabete, sullo sviluppo cardiaco congenito e sui percorsi neuroevolutivi in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Islet-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Isl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Isl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Isl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Islet-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Isl1 per lo studio della segnalazione di Islet-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Isl1 critici per la funzione di Islet-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Isl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Islet-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Islet-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Isl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Islet-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Islet-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Isl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Isl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.