IRF-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402135-ACT

Il fattore regolatorio dell’interferone 2 (IRF2) codifica IRF-2, un fattore di trascrizione legante il DNA che modula la segnalazione dell’interferone di tipo I e, più in generale, i programmi genici dell’immunità innata. IRF-2 compete con membri correlati della famiglia IRF sugli elementi di risposta stimolati dall’interferone, modulando la trascrizione indotta dalle citochine e plasmando le risposte antivirali, il tono infiammatorio e le decisioni sullo stato cellulare. Attraverso queste attività, IRF-2 influenza vie che controllano la presentazione dell’antigene, l’apoptosi e reti trascrizionali legate al ciclo cellulare. Un’espressione o un’attività deregolata di IRF2 è stata associata a disfunzioni immunitarie e a fenotipi trascrizionali rilevanti per il cancro, supportandone l’uso come nodo meccanicistico in studi di immunologia e di segnalazione oncogenica.

IRF-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IRF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IRF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IRF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IRF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-2 nelle cellule tumorali con espressione di IRF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.