IRF-1 Plasmide di attivazione CRISPR (r): sc-437365-ACT

Il fattore regolatore dell’interferone 1 (IRF-1) è un fattore di trascrizione specifico per sequenza che integra la segnalazione dell’interferone con i programmi immunitari innati e adattativi nelle cellule di ratto. Una volta attivato a valle delle vie JAK/STAT, IRF-1 promuove la trascrizione di geni stimolati dall’interferone coinvolti nella restrizione antivirale, nel processamento e nella presentazione dell’antigene e nelle reti di citochine/chemochine, influenzando anche i checkpoint del ciclo cellulare e l’apoptosi. Attraverso il crosstalk con NF-κB e altri regolatori responsivi allo stress, IRF-1 contribuisce a modulare l’espressione genica infiammatoria e la differenziazione delle cellule immunitarie. Un’attività deregolata di IRF-1 è stata associata, in modelli sperimentali, a un’attivazione immunitaria aberrante e a una compromissione della difesa dell’ospite, a supporto della sua rilevanza negli studi su infezione, infiammazione e danno tissutale immunomediato.

IRF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (r) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-1 nelle cellule tumorali con espressione di silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.