IP3R-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421192

Panoramica

Itpr1 codifica il recettore dell’inositolo 1,4,5-trisfosfato di tipo 1 (IP3R-I), un canale di rilascio del Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico che converte l’IP3 generato a valle di recettori accoppiati alla PLC in segnali di calcio citosolici. I transitori di Ca²⁺ guidati da IP3R-I coordinano la trasmissione sinaptica, l’eccitabilità neuronale, l’espressione genica e il metabolismo mitocondriale, e modulano processi Ca²⁺-dipendenti come l’autofagia e l’apoptosi. Nel topo, Itpr1 è altamente rilevante per la funzione dei circuiti neurali, in particolare nei neuroni di Purkinje del cervelletto, ed è spesso studiato nel contesto della coordinazione motoria e di fenotipi cellulari associati alla neurodegenerazione. Un’alterazione della segnalazione mediata da IP3R-I è inoltre collegata a difetti più ampi dell’omeostasi del Ca²⁺, che influenzano le risposte allo stress del RE e le reti di segnalazione intracellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itpr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itpr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itpr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IP3R-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itpr1 per lo studio della segnalazione di IP3R-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Itpr1 critici per la funzione di IP3R-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itpr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IP3R-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IP3R-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itpr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IP3R-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IP3R-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itpr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itpr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.